Evaluación de la eficacia en la reducción de huevos de una combinación de Ivermectina + Praziquantel contra cestodes (Anoplocephalidae) y nematodes pertenecientes a los pequeños estróngilos (Strongylidae) de los equinos.

Introducción: Entre los cestodes que parasitan a los equinos, Anoplocephala perfoliata es el más común  y el de mayor importancia veterinaria. Existe un creciente interés para su control debido a información relativamente reciente lo incrimina en severos transtornos gastrointestinales e incluso la muerte de animales severamente parasitados. Las infecciones por este parásito pueden ser inaparentes pero en ocasiones los estadíos adultos del parásito pueden adherirse a la válvula ileocecal causando edemas e hipertrofia del ileon. Esto puede resultar en cólicos severos aparentemente por obstrucción o intususcepción del intestino delgado dentro del ciego-colon (Barclay et al, 1982 ; Owen et al, 1989 ; Proudman & Trees, 1999 ). Actualmente son cada vez más frecuentes las presentaciones antiparasitarias equinas que combinan drogas con actividad anticestódica como el pamoato de pyrantel o el praziquantel y lactonas macrocíclicas para el control de nematodes y artrópodos. El objetivo del presente estudio es informar sobre la actividad de una formulación conteniendo ivermectina 1% más praziquantel 15 % (“Antiparasitario Total Equino”, Lab OVER SRL) en equinos naturalmente parasitados con Anoplocephala spp.

  1. Materiales y métodos:

2.1.Duración, localización de las experiencias, animales experimentales y conformación de grupos:  En el período comprendido entre abril y julio del 2006 se realizaron dos experiencias en establecimientos de las provincias de Córdoba (establecimiento  A) y de Santa Fe (establecimiento B) con caballos infectados naturalmente con cestodes (Anoplocephala spp) y nematodes pertenecientes al grupo de pequeños estróngilos (Strongylidae). El establecimiento A está localizado en el departamento Totoral (Córdoba) y se dedica a la producción de equinos para polo . El establecimiento B se encuentra en el departamento Castellanos (Santa Fe) y se utilizaron equinos de raza criolla y mestizos. En ambas experiencias la población de caballos utilizadas estaba compuesta  por animales que mostraran huevos de Anoplocephala spp en sus heces y que no habían recibido tratamientos antihelmínticos en los previos 80 días al inicio de la experiencia. En el establecimiento A y antes del inicio de la experiencia (días –2 y  0) se tomaron en dos oportunidades muestras de materia fecal directamente del recto en 62 yeguas de 4 a 8 años de edad. En cualquiera de estos días, si se observaban  huevos de Anoplocephala , el animal era considerado como positivo y se seleccionaron de esta manera 21 equinos  que fueron asignados al azar a dos grupos de 11 (grupo tratado) y 10 animales cada uno (grupo control sin tratamiento). Debido a la baja correlación existente en el número de huevos y grado de infección que muestran los cestodes equinos, el criterio de selección fue el de positivo o negativo a la presencia de huevos independientemente de su número. En este establecimiento, los animales estaban previamente identificados por numeración a fuego y para facilitar la individualización se utilizaron en forma adicional números con pintura azul (control) y naranja (tratados) sobre la grupa. En las fotos 1 y 2 se presentan el tipo de animales utilizados y los trabajos pre-tratamiento. En el establecimiento B, se realizaron cuatro muestreos pre-tratamiento en  los días – 5;  – 4; – 2  y – 1  en 18 animales de ambos sexos seleccionándose de esta manera 14 equinos que mostraron en alguno de estos días huevos de Anoplocephala spp en sus heces y los que fueron asignados al azar a dos grupos de siete animales cada uno . La identificación de los animales en este establecimeinto se realizó por la combinación de sexo, nombre y color de la capa (pelaje). 2.2.Técnicas coproparasitológicas utilizadas :  Debido a la baja sensibilidad que tienen los métodos coprológicos convencionales para identificar infecciones por cestodes en los equinos, la identificación y cuantificación de los huevos de Anoplocephala spp se realizó utilizando el método de centrifugación-flotación de Cornell-Wisconsin ( Meana et al, 1998 ; Slocombe,.A J.O.D. 2006.) . Brevemente, se mezclaron 10 g de heces en 150 ml de agua  y luego de filtrado se tomaron 15 ml y se centrifugó a 1.500 rpm por 5 minutos. Se descartó el sobrenadante y al sedimento se agrego solución sobresaturada de azúcar (densidad 1,27) y se repitió el centrifugado colocando sobre cada tubo un cubreobjeto de 22 mm .Cada cubreobjeto se examinó a 100x y se determinó la presencia y el número de huevos de cestodes para cada muestra. Para la determinación del número de huevos de nematodes (Strongylidae) se utilizó la técnica de Mac Master modificada. En muestras positivas de equinos de ambos establecimientos se tomaron microfotografías utilizando un microscopio óptico (Zeiss) y una cámara digital adaptada al mismo (Moticam 2000). Complementariamente a estas determinaciones se realizaron coprocultivos para identificación de larvas de nematodes 2.3 Tratamientos y frecuencia de evaluaciones post tratamiento: En cada equino seleccionado se estimó el peso corporal a través de determinaciones del perímetro torácico y en el día 0 , los animales asignados al grupo tratado recibieron por vía oral una dosis de 1ml/60kpv de la formulación experimental en gel (equivalente a 200 ug/kpv de ivermectina y 2,5 mg/kpv de praziquantel ;”Antiparasitario Total Equino”, Laboratorio OVER SRL). Dicho gel está contenido en una jeringa plástica y para la administración se depositó la formulación experimental sobre la parte posterior de la base de la lengua e inmediatamente se elevó la cabeza del animal tratado para favorecer la deglución. Luego del tratamiento, en el establecimiento A, se tomaron muestras de materia fecal de cada uno de los animales de ambos grupos en los días  7 , 14, 21 y 28 posteriores al mismo para determinar la presencia o ausencia de huevos de  Anoplocephala spp para cada día.  En el establecimiento B, estas mismas determinaciones se llevaron a cabo en los días 5, 7, 10, 14, 16 , 21 y 28 posteriores al tratamiento. 2.4. Observaciones clínicas luego de los tratamientos: Los animales tratados fueron observados a las 2, 4, 24 y 48 hs post tratamiento para determinar la posibilidad de efectos indeseables. Las observaciones incluyeron aspectos físicos clínicos generales (estado de exitación o depresión del sensorio, locomoción, actitudes de comportamiento, presencia de diarrea o  constipación y signos de cólicos) . 2.5. Análisis de los datos:  Las diferencias en la distribución del número de huevos entre ambos grupos de equinos fue analizado estadísticamente utilizando el test no-paramétrico de Wilcoxon. En ambos casos se utilizó el programa Infostat/profesional versión 2006p.1 (Universidad Nacional de Córdoba). En los días del período de observación en que se detectaron diferencias significativas (p<0,001) se determinó el porcentaje de eficacia para cada uno de los días a través de la siguiente fórmula: % de eficacia = Promedio del nº de huevos en GC – Promedio del nª de huevos en G.T    x 100 Promedio del nº de huevos en GC

  1. Resultados y discusión La formulación en gel fue bien aceptada por los equinos y no hubo pérdida del producto o manifiesto rechazo del mismo. En el establecimiento A, además de los animales del grupo tratado y a los fines de complementar información sobre la seguridad del producto, la formulación se administró a 24 animales adicionales a la dosis previamente indicada. Así mismo, en el establecimiento B se trataron adicionalmente cuatro equinos con 5 mg de praziquantel y 400 ug de ivermectina por kg de peso vivo equivalente al doble de la dosis sugerida por el laboratorio productor. En ambos casos estos animales no se incluyen en las observaciones sobre eficacia porque no habían mostrado resultados positivos en las muestras de heces pre-tratamiento. No se observaron signos clínicos neurológicos o gastro-entéricos anormales en los caballos tratados en ambos establecimientos. Una yegua del establecimiento B que recibió el doble de la dosis mostró a las 24 hs heces de menor consistencia de lo normal pero a las 48 hs las deposiciones se consideraron como normales. De acuerdo a las determinaciones coprológicas pre-tratamiento la prevalencia de equinos naturalmente infectados fue del  33,8 y 77,7 % para los establecimientos A y B respectivamente (Fotos 3 y 4). Las técnicas coprológicas diagnósticas para Anoplocephala spp presentan una baja sensibilidad que oscila aproximadamente entre el 54 al 60 % (Proudman & Edwards; Meana et al, 1998). Es altamente probable que el mayor número de observaciones efectuadas resultara en una mayor sensibilidad del método diagnóstico y podría explicar (al menos en parte) la mayor prevalencia observada en el establecimiento B.

Fotos 3 y 4. Huevos de cestodes observados antes del tratamiento en el establecimiento A (10x) y B (40x) Además de las observaciones específicas sobre la actividad de la formulación experimental de ivermectina + praziquantel sobre cestodes que motivan el presente informe,  se obtuvo información adicionales sobre nemátodes. En este contexto, el promedio de huevos de nemátodes pertenecientes a la familia Strongylidae observados en las muestras pre-tratamiento fue de 418 y 300 en los equinos de los establecimientos A y B respectivamente. Luego del mismo la eficacia de la ivermectina de la formulación experimental fue superior al 98 % durante los 28 días del período de observación.  En los coprocultivos todas las larvas obtenidas fueron clasificadas como pertenecientes al grupo Ciatostoma ( pequeños estróngilos). En las tablas 1-4 se sintetizan las observaciones efectuadas sobre la actividad de la formulación experimental sobre cestodes equinos (Anoplocephalidae). En ambas experiencias, se observó un alta actividad del praziquantel para disminuir el número de huevos en las heces de los animales tratados. La eficacia osciló entre el 97,5 al 100 % en el establecimiento A y 92,4% al 100 % en el establecimiento B. Si se considera ambas experiencias, eficacias del 100 % se registraron en el 40 % de los días y la eficacia general fue superior al 97 %. Información referente a la alta eficacia del praziquantel ha sido publicada en estudios de campo  así como en pruebas críticas de eficacia (Marley et al, 1993 ; Rehbein et al, 1993 ; Slocombe 2006). Tabla 1. Huevos de cestodes eliminados luego del tratamiento por cada uno de los animales experimentales y para cada día del período de observación en el establecimiento A. Días post-tratamiento

Equino (sexo y número)Grupo (tratado o control)Día 7Dia 14Día 21Día 28
1Tratado0000
2Tratado0000
3Tratado0000
4Tratado0120
5Tratado0000
6Tratado0000
7Tratado1000
8Tratado0000
9Tratado0000
10Tratado0000
11Tratado0000
12Control3422
13Control1035
14Control9712
15Control2066
16Control2807
17Control3322
18Control11635
19Control0030
20Control5534
21Control0225

Tabla 2. Relación entre equinos infectados y examinados en cada grupo y porcentaje de eficacia para cada uno de los días post tratamiento en establecimiento A.

Día Post TratamientoEquinos infectados/examinados en G.C. ( promedio de h.p.g.)Equinos infectados/examinados en G.T. ( promedio de h.p.g).Porcentaje de eficacia
78 / 10    ( 3,6 a)1 / 11   (0,09 b)97,5 %
147 / 10    (3, 5 a)1 /11   (0,09 b)97,4 %.
219 / 10    (2,5 a)1 / 11   (0,18 b)95 %
289 / 10     (3,8 a)0 / 11…(0 b)100 %

a- b entre filas , diferentes letras difieren significativamente  p < 0,001 Tabla 3. Huevos de cestodes eliminados luego del tratamiento por cada uno de los animales experimentales y para cada día del período de observación en el establecimeinto B Días post-tratamiento

Equino número (sexo)Grupo (tratado o control)Día 5Dia 7Día 10Día 14Día 16Día 21Día 28
1 (H)Tratado0000000
2 (M)Tratado0000000
3 (M)Tratado2011002
4 (M)Tratado0000000
5 (H)Tratado0000000
6 (H)Tratado0000000
7 (M)Tratado0000000
8 (H)Control3033312
9 (H)Control2972663
10 (H)Control0355331
11 (H)Control4022012
12 (H)Control3222025
13 (H)Control91137737
14 (H)Control5302479

Tabla 4. Relación entre equinos infectados y examinados en cada grupo y porcentaje de eficacia para cada uno de los días post tratamiento en establecimiento B.

Día Post TratamientoEquinos infectados/examinados en G.C. ( promedio de h.p.g.)Equinos infectados/examinados en G.T. ( promedio de h.p.g).Porcentaje de eficacia
56 / 7    ( 3,71 a)1 / 7 (0,28 b)92,4 %
75 / 7    (4 a )0 /7   (0 b)100 %
106 / 7   (3,14 a)1 / 7  (0,14 b)95,5 %
147 / 7    (3,28 a)1 / 7  (0,14 b)95,7 %
165 / 7   (3,28 a)0 / 7  (0,14 b)100 %
217 / 7   (3,28 a)0 / 7   (0 b)100 %
287 / 7   (4,14 a)1 / 7 (0,28 b)93,2 %

a- b entre filas , diferentes letras difieren significativamente  p < 0,001

  1. Conclusiones:de acuerdo a los resultados de la presente experiencia la administración de la formulación evaluada mostró un alta eficacia contra Anoplocephala spp (> 97 %) y no se observaron en los equinos experimentales síntomas clínicos o efectos neurológicos indeseables luego de su adminsitración oral. En forma adicional, los resultados sobre nematodes de la familia Strongylidae demostraron que no existe interferencia del praziquantel cuando se combina con la ivermectina y se administra como una única dosis oral y puede ser utilizada para el control de ambos grupos de parásitos.
  2. Referencias Barclay W.P., Phillips T.N., Foerner J.J. (1982).  Intussucepción associated with Anoplocephala perfoliata  in five horses. Journal American Veterinary Medicine Association 180: 752-753.

Marley S.A., Dutchens D.E., Reinemeyer C.R., Holste J.E., Paul A.J., Rehbein S. 2003. Efficacy of an ivermectin (0,2 mg/kg) and praziquantel (1.0 mg/kg) combination paste against cestodes, nematodes and bots when administered as a single oral dose to horses. 19 th International Conference of the World Association fot thr Advancement of Veterinary Parasitology. New Orleans. U.S.A., 168 Meana A., Luzon M., Corchero J., Gomez-Bautista M. (1998) Realibility of coprological diagnosis of Anoplocephala perfoliat infection. Veterinary Parasitology 74: 79-83. . Owen R.A., Jagger D.W., Quan Taylor R. (1989). Caecal intussusceptions in horses and the significance of Anoplocephala perfoliata. Veterinary Record . 124 : 34-37. Proudman  C.J., Trees A.J. (1999). Tapeworms are a cause of intestinal disease in horses. Parasitology Today 15: 156-159. Proudman C.J. , Edwards G.B. (1992) . Validation of a centrifugation/flotation technique for the diagnosis of equine cestodiasis. Veterinary Record 131: 71-72. Rehbein S., Holste J.E., Doucet M.Y., Fenger C., Paul A., Reinemeyer C.R., Yoon S. , Marley S.E. 2003. Field efficacy of ivermectin plus praziquantel oral paste against naturally acquired, gastrointestinal nematodes and cestodes of horses in North America and Europe. 19 th International Conference of the World Association fot thr Advancement of Veterinary Parasitology. New Orleans. U.S.A., 168. Slocombe,.A J.O.D. ( 2006). A modified critical test and its use in two dose titration trials to assess efficacy of praziquantel for Anoplocephala perfoliata in equids. Veterinary Parasitology 136: 127-135) Córdoba.; 25 de agosto de 2006 Oscar S. Anziani (Med. Vet., M.Sc., Dr.) ; Gabriel Caffe (Med.Vet.) y Nicolas Cervilla (Med. Vet.) Cátedra de Parasitología. Universidad Católica de Córdoba.